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        Western Blot膜再生液

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        質量標準:
        膜再生液可以對同一張膜進行多次Western Blot檢測。在室溫條件下,將用過的膜浸泡在膜再生液10-60分鐘,可在不影響抗原蛋白的情況下清除膜上結合的抗體。隨后,可以使用不同的抗體進行下一輪Western Blot實驗,因而可利用同一張膜進行多次蛋白檢測。適宜從少量樣品多次檢測不同蛋白質。即使樣品量并不匱乏,采用這一策略多次檢測同一張膜上的蛋白,能省去給藥處理、蛋白電泳和膜轉移等耗費性步驟。而且可以消除重新上樣而帶來的誤差,使可比性更強。

        Western Blot膜再生液特點是:無毒無味無害,室溫下使用,室溫下保存;可對同一張膜進行5次以上的Western Blot檢測。

        適用:清除硝酸纖維素膜或PVDF膜上結合的抗體,不影響抗原蛋白。


        使用方法:

        1,  將膜充分浸泡于適當體積的再生液中,室溫洗脫10-20分鐘,時間長短應該參考后面的說明進行優化,洗脫某些抗體需較長時間,更有60分鐘之久。

        2,  取出膜,用洗滌液(如TBST等)漂洗兩次。

        3,  此時膜上抗體已除去,可再加入另一種抗體。

        說明:

        1,  膜再生液實質是在不影響膜上結合的抗原的條件下將抗體洗脫下來,實際操作中,膜類型、抗體類型、濃度及抗原特性都影響洗脫難易度,因而按下面說明優化至關重要。

        2,  用ECL顯色后,再生液洗脫幾分鐘后,可再次加入ECL顯色液顯影,如膠片上顯示條帶,表明抗體未除凈,須進一步在再生液中浸泡,至膠片上無顯色。

        3,  由于至今尚清楚的原因,使用脫脂奶粉封閉的膜要比使用BSA封閉的膜更容易再生,所以盡可能的用脫脂奶粉封閉。

        4,  盡量避免讓膜干燥。

        貯存:
        室溫
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