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        通用基因組DNA提取試劑盒

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        通用基因組DNA提取試劑盒 50T 詢價 現貨
        通用基因組DNA提取試劑盒 100T 詢價 現貨
        性狀:
        試劑盒內容:50T  100T
        RNase A 1ml 1ml×2
        蛋白酶K 1ml 1ml×2
        溶液A 25ml 50ml
        溶液B 25ml 50ml 
        漂洗液 15ml 15ml×2
        洗脫液 15ml 30ml 
        吸附柱 50個 100個
        收集管 50個 100個
        說明書 1份 1份
        質量標準:
        產品簡介:

        本試劑盒為通用型,適合于從土壤,糞便,昆蟲,以及其他樣本中提取基因組DNA。對細菌,真菌,昆蟲等樣本都具有很好的裂解效果,最大限度的保留了生物DNA的多態性。

        使用本試劑盒提取的DNA產量大、完整性好,可直接用于各種常規操作,包括酶切、PCR 、文庫構建、Southern 雜交等實驗。

        操作步驟:

        使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇,加入體積請參照瓶上的標簽。所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。

        1、樣品的處理:

              1)土壤:稱取0.1-0.3g (根據干濕)土壤,放入研缽中,倒入適量的液氮,立即研磨,重復3 次,使土壤顆粒研成粉末,加500ul溶液A,振蕩至徹底懸浮。

              2)糞便:稱取0.1-0.3g (根據干濕) 糞便,加500ul溶液A,振蕩至徹底懸浮。

              3)昆蟲:稱取0.1-0.3g昆蟲,倒入適量的液氮,立即研磨,重復3次,使昆蟲研成粉末,加500ul溶液A,振蕩至徹底懸浮。

              4)未知樣品,如為細未狀,可直接稱取0.1-0.3g(根據干濕)加500ul溶液A,如為塊狀,可0.1-0.3g用液氮研磨成粉未,再加500ul溶液A,振蕩至徹底懸浮。

        2、向懸浮液中加入20ul的RNase A(10mg/ml),55℃放置10min。

        3、加入20ul的蛋白酶K(10mg/ml),充分混勻,55℃水浴消化,30min。消化期間可顛倒離心管混勻數次,12000轉離心10min。將上清轉移到一個新的離心管中。如有沉淀,可再次離心。

        4、加入500ul溶液B,充分混勻。如出現白色沉淀,于55℃放置5min,沉淀即會消失,不影響后續實驗。如溶液未變清亮,說明樣品消化不徹底,可能導致提取的DNA量少及不純,還有可能導致上柱后堵柱子,請增加消化時間。

        5、加入500ul無水乙醇,充分混勻,此時可能會出現絮狀沉淀,不影響DNA的提取,可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中,放置2min (分兩次加入,每次700ul)。

        6、12000rpm離心2min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。

        7、向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。

        8、向吸附柱中加入600ul漂洗液,12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中

        9、12000rpm離心2min,將吸附柱置于室溫或50℃溫箱放置數分鐘,目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,否則漂洗液中的乙醇會影響后續的實驗如酶切、PCR等。

        10、將吸附柱放入一個干凈的離心管中,向吸附膜中央懸空滴加50-200ul經65℃水浴預熱的洗脫液,室溫放置5min,12000rpm離心2min。

        11、離心所得洗脫液再加入吸附柱中,室溫放置2min,12000rpm離心2min,即可得到高質量的基因組DNA。

        注意事項:

        1、由于樣品不同,最終提取的DNA含量和純度也有所不同,一般來說,如果所提取DNA用電泳的方法檢測不到,PCR會有結果,樣品盡可能的新鮮。否則會導致提取的DNA片段較小且提取量也下降。

        2、若試劑盒中的溶液出現沉淀,可在65℃水浴中重新溶解后再使用,不影響提取效果。

        3、如果樣品消化不徹底,后面的離心步驟中可能會出現堵柱子的情況,可適當延長離心時間。

        4、洗脫緩沖液的體積最好不少于50ul,體積過小會影響回收效率;洗脫液的pH值對洗脫效率也有影響,若需要用水做洗脫液應保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調至此范圍),pH值低于7.0會降低洗脫效率;DNA產物應保存在-20℃,以防DNA降解。

        5、DNA濃度及純度檢測(濃度較高時):得到的基因組DNA片段的大小與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關?;厥盏玫降腄NA片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。DNA應在OD260處有顯著吸收峰, OD260值為1相當于大約50μg/ml雙鏈DNA、40μg/ml單鏈DNA。OD260/OD280比值應為1.7-1.9,如果洗脫時不使用洗脫緩沖液,而使用去離子水,比值會偏低,因為pH值和離子存在會影響光吸收值,但并不表示純度低。

        貯存:
        室溫(15℃-25℃) 干燥保存,復檢期12個月,2℃-8℃保存時間更長。開封后請將RNase A,蛋白酶K

        于-20℃保存。

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